Clinical Application of T-SPOT.TB for Interferon-γ release assay in the immunodiagnosis of Tuberculosis

中RD1 包含9个开放读码框(Rv3871 ~Rv3879 c), 被证实在所有的卡介苗菌株中均不存在,因此最具有编码特异性抗原的潜质。结核感染后体内长期存在抗原特异性的记忆性T 细胞, 当再次遇到抗原刺激时, 能迅速活化增殖, 释放γ干扰素。综合以上原理, 英国学者Lalvani 建立了以RD1 编码的结核特异性抗原6 kD早期分泌靶向抗原(early secreting antigen target-6, ESAT-6) 和10 kD培养滤过蛋白(culture filtrate protein-10, CFP-10)肽段库为刺激原, 检测外周血中结核特异性释放C干扰素的T淋巴细胞, 从而诊断结核感染的新方法。T-SPOT.TB2004年在欧洲、2005年在加拿大被批准使用, 美国FDA的审批在2008年完成。T-SPOT.TB是目前C干扰素释放分析诊断结核感染的最主要方法之一。

T-SPOT.TB的实验结果清晰, 易于判断。实验设有空白对照、阳性对照以及以ESAT-6 和CFP-10肽段库作为刺激原的两个实验孔。空白对照孔内斑点数小于10且阳性对照孔内斑点数大于20时视为实验有效。当空白对照孔内斑点数小于6时, 任一实验孔斑点数减去空白对照后大于等于6, 结果判为阳性; 当空白对照孔内斑点数大于6时, 任一实验孔斑点数大于空白对照的2倍, 结果判为阳性。T-SPOT.TB的实验结果用每106PBMCs中斑点形成细胞(spot forming cells, SFC s)的数目来描述, 即SFCs/106PBMCs。
T-SPOT.TB的临床意义
敏感性与特异性评价：潜伏性结核感染的诊断无金标准, T-SPOT.TB 敏感性评价多在培养或病理阳性的活动性结核患者中进行。Pai等对近3 年的13项研究进行Meta分析, 这些研究共纳入726例受试者, 绝大多数是结核培养阳性、HIV 阴性的成年人, 分析表明T-SPOT.TB 的综合敏感性为90%。在免疫力低下的人群中, T-SPOT.TB依然能够维持较高的敏感性。Chapman等研究显示39例HIV阳性的结核患者中T-SPOT.TB的敏感性为90%, 而PPD 皮试的阳性率仅为72%。Liebeschuetz等报道了对293例怀疑结核的非洲儿童的随访结果, 这些儿童的平均年龄为3 岁, 约46% HIV 阳性, 多数合并营养不良, 对于确诊结核或高度怀疑结核的病例, T-SPOT.TB的阳性率为83%, PPD 皮试的阳性率为63%, 两者差异具有显著性(P<0.001)。数据分析显示年龄、HIV 感染状态和营养不良的严重程度对T-SPOT-TB结果无影响, 但均能导致PPD 皮试结果的显著差异。提示T-SPOT.TB 在免疫力低下的个体中具有更高的诊断效能。Nicol等在2009年发表了对243 例可疑结核的婴幼儿的研究结果,这些婴幼儿平均年龄为18个月, 在经痰或胃灌洗液结核菌培养阳性确诊的病例中, T-SPOT.TB 的阳性率仅为50%, 而年龄大于12个月的幼儿与12个月之内的婴儿相比, 前者阳性率明显增高, 提示在婴儿中诊断结核感染会降低T-SPOT.TB的敏感性。在肺外结核的诊断中, T-SPOT.TB 具有较高的敏感性。Ferrara等和Lee等报道的两个前瞻性研究中, 共包括18例肺外结核患者, T-SPOT.TB 的阳性率为100% 。Kmi 等随诊72例怀疑肺外结核患者的前瞻性研究显示, 对于活动性肺外结核, T-SPOT.T和PPD的敏感性分别为94%和47%, 二者比较差异具有显著性(P<0.001)。47% 的随诊对象合并有导致免疫低下的情况, 包括HIV 感染、肿瘤、移植、糖尿病以及自身免疫病等, 可能是导致PPD皮试的阳性率显著降低的原因。T-SPOT.TB特异性评价的研究都在结核低流行区进行。Pai等的Meta分析中纳入了6项研究,其中5项中的受试者都常规地接受BCG免疫。6项研究共包括290名受试者, 93% 为无结核接触史的健康成年人, 其综合特异性为93%。

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